Guanidino tiocianatas | 593-84-0 | yra stiprus baltymų denatūrantas. Tai balti kristaliniai milteliai, dirginantys ir jautrūs šviesai. Jis tirpsta etanolyje ir vandenyje, jo lydymosi temperatūra yra 118℃. Guanidino tiocianatas daugiausia naudojamas denatūravimui, ląstelių lizė ir RNR bei DNR ekstrahavimas. Tai yra bendras cheminis nukleorūgščių ekstrahavimo komponentas.
Patente cn111500664a aprašytas nukleotidų ir polipeptidų ekstrahavimo iš gyvūnų vidaus organų metodas, naudojant guanidino tiocianatą. Nukleotidai yra junginiai, sudaryti iš purino bazės arba pirimidino bazės, ribozės arba dezoksiribozės ir fosforo rūgšties, kurie plačiai naudojami medicinoje, motinos ir vaiko produktuose, pagarduose ir maisto prieduose. Polipeptidas yra Î ±- junginiai, kuriuos sudaro peptidiniais ryšiais sujungtos aminorūgštys, yra tarpiniai baltymų hidrolizės produktai, apimantys įvairias žmogaus hormonų, nervų, ląstelių augimo ir dauginimosi sritis. Jų svarba yra reguliuoti įvairių organizmo sistemų ir ląstelių fiziologines funkcijas, aktyvinti atitinkamus organizmo fermentus, skatinti tarpinės metabolinės membranos pralaidumą arba kontroliuoti DNR transkripciją arba paveikti specifinę baltymų sintezę.
Gyvūnų vidaus organuose gausu nukleotidų ir peptidų, tačiau šiuo metu nukleotidai ir peptidai išgaunami dažniausiai atskirai, dėl to eikvojami ištekliai ir vyksta sudėtingi procesai. Guanidino tiocianatas padeda išgauti nukleotidus ir peptidus iš gyvūnų vidaus organų. Konkretūs metodai yra šie:
Iš pradžių šviežių gyvulių vidaus organus nuplauti, nusausinti, susmulkinti, tada sutrinti, įpilti dejonizuoto vandens, kad gautųsi sumaišytas tirpalas, tada į sumaišytą tirpalą įpilti guanidino tiocianato tirpalo, vibruoti ir gerai išmaišyti, o tada stovėti. Tada į jį pridedama nešiklio, turinčio silicio dioksido, nes guanidino tiocianatas suskaldys ląsteles, o iš ląstelių išsiskiriantys nukleotidai bus sujungti su silicio dioksido nešikliu. Išimkite nešiklį, kuriame yra silicio dioksido, absorbuokite ir atskirkite eliuentu, kad gautumėte išgrynintus nukleotidus.
Tada NaCl tirpalas pridedamas prie likusio tirpalo, iš kurio buvo išimtas silicio dioksido nešiklis, sumaišytas tirpalas ekstrahuojamas, tada pridedama sudėtinė proteazė, tada atliekama fermentinė hidrolizė mikrobangų krosnelėje, fermentinis hidrolizės tirpalas kaitinamas vandens vonioje. , centrifuguojama, paimamas supernatantas ir po džiovinimo užšaldant gaunamas polipeptidas.
Taikant šį metodą naudojamos savybės, pagal kurias guanidino tiocianatas gali sunaikinti ląstelių struktūrą ir denatūruoti baltymą. Jis gali ne tik nuosekliai išgauti nukleotidus ir peptidus, bet ir turi paprasto metodo bei didelio efektyvumo pranašumus. Tuo pačiu išvengiama biocheminių reagentų reakcijos problemos, kai ekstrahuojant pridedami biocheminiai reagentai.